Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病症进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现肾脏自身HIV到经常出现1DF肾病病理症状的实质性率在学童时期就有比较好的描述，多个肾脏自身HIV特征性的学童之前有70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的学童这一比例增大到84%。相对之下，占病理1DF肾病一半以上的DF1DF肾病的发作有助于还并未得到应有的研究成果。

更是多的人开始用于分期系统来定义1DF肾病的实质性：生殖在经常出现多种肾脏自身HIV时进入第1阶段，经常出现胰岛素精神状态时进入第2阶段，经常出现症状时进入第3阶段。一些多发肾脏自身HIV特征性的生殖，在1期和2期，实质性想像中快，并发展为发作的1DF肾病。我们之前描述了第一组合成在首次监测到多种肾脏自身HIV比对后至较少10年无肾病的想像中想像中快实质性者，这第一组病患000人较少，但特征非常指明。随后，我们发现肾脏自身蛋白选择性CD8+T细胞核底物在实质性快速的病患之前理论上不发挥作用，但在近来发作和长期发挥作用的肾病病患之前很不易监测到。这显然确实，与实质性病患相对，这些病患自身免疫底物的调节强化。

早期研究成果确实，尽管调节性T细胞核(Treg)数量情况下，但肾病病患发挥作用一些功能缺陷，其之前还包括对IL-2的底物能够降低。此外，肾病病患之前的波动CD4+T细胞核显然对调节更是具抵抗性，表现为波动T细胞核的抑制作用消退，大自然造成了的Treg和质外造成了的诱发Treg，以及蛋白经历的CD4+T细胞核之前IL-2底物消退。本研究成果的目的是描述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在一小群想像中快速实质性者之前的特征，他们的总数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方式：BOX研究成果是一项以这群人为基础的纵向研究成果，在21岁所列确诊的病患亲友之前核对1DF肾病的危险因素。我们之前描述了长期快速实质性者的特征，他们保持多重肾脏自身HIV特征性超过10年，但并未经常出现肾病的病理症状，想像中快性或非透过性自身免疫。随后，10名继续保持无肾病并不想透过大量肾脏比对的快速实质性者纳入T和B细胞核功能系统性。在目前的研究成果之前，8名想像中快实质性者(SP第一组)，之前位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的肾脏自身HIV特征性。所有的参与者都位处1DF肾病实质性的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身HIV对某些蛋白的特征性底物，然而，一名病患已经位处2期至较少6年，但并未经常出现病理症状，一名病患被确诊为肾病，该测试者72岁，在通过检视检验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性之前对该NADP透过了原则上评估。剥离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多变量流式细胞核术和T细胞核抑制作用试验评估NADP之前Treg的阈值、环境因素和功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和回归)透过无委派聚类系统性，评估Treg环境因素。

结果：与心理健康NADP相对，来自想像中快实质性质的思绪CD4+T细胞核的委派聚类看出，激来生的思绪CD4+ Treg阈值增大，与糖皮质激素诱发的TNFR方面蛋白(GITR)指出增大有关。一名HbA1c升高的病患与实质性快速者和也就是说的对照第一组相对，Treg谱有所不同。功能系统性确实，与心理健康NADP相对，来自快速实质性质的Treg抑制的CD4+波动T细胞核抑制作用明显受到影响。表现为对波动CD4+T细胞核CD25和CD134指出的抑制作用增大。

三幅1 深入的环境因素系统性看出，CD4+Treg亚DF在想像中快实质性队列之前增大。由FlowSOM分解的Treg过道，涌进在来自所有NADP的来生CD4+CD45RA -细胞核上。根据上标物指出鉴定出10个元簇:思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;支线程Treg_1;支线程Treg_2;支线程Treg_3;和支线程Treg_4。(a)用于9个不同Treg上标分解的10个元簇的MST。每个路由表代表者一个集群(100个集群)，更是大的元集群(10个元集群)在路由表第一组周遭上色。每个路由表之前的饼三幅指出单个上标的指出分级。(b)每个元聚类的热三幅，以看出整质上标指出。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解三幅，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对核素为每个metacluster箱内支线三幅(核素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:支线程Treg_2 (e),支线程Treg_3 (f),支线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞核(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞核(l)。浅蓝色边框代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用于CITRUS的预测模DF证实，Treg阈值的增大是实质性快速的logo。标准依赖型(a - f)和柑橘系统性(g-k)相当SP参与者和也就是说的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)性状CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族裔的代表者性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR指出透过剥离，模拟器FlowSOM族裔。(b) HD(黑点)和SP(白点)第一组以及NADPSP 606(浅蓝色)之前CD25+ cd127的阈值核心内容三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型偏序的箱内支线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(支线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(支线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(支线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+支线程T cell)。(g - i)玉米簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3指出强度着色，箭头凸显的簇被辨认为SP和HD队列错综复杂的不同。(j)箱内支线三幅看出了在SP(白点)和HD(灰点)第一组之前，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对核素(比例)。(k)三幅表看出每个簇的环境因素(粉红色)和Treg上标相对指出与背景指出(深蓝色);上列，支线程Treg_3;上面一行，支线程Treg_4。背景与所有其他簇之前上标的指出有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对标记秩检验

三幅3 与心理健康献血者相对，实质性快速者思绪treg的GITR增大。每个思绪CD4+T细胞核元簇(思绪T细胞核_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞核;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核;支线程Treg_2;支线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个指出上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的指出热三幅(sp606不还包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇之前所有HD(黄色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR指出串联，看出三幅表(c)和核心内容三幅(d)。Wilcoxon配对标记秩和检验，p< 0.07(浅蓝色)所有NADP还包括，p< 0.05(深蓝色)NADPSP 606和也就是说的HD不还包括在测试之前。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之前GITR指出，从标准依赖型，从所有HD(黄色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(浅蓝色)串联，看出三幅表(e)和核心内容三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对标记秩检验

三幅4 来自快速实质性的CD4+ treg细胞核控制波动CD4+T细胞核的能够降低。SP第一组用深蓝色的支线和边框指出，HD第一组用紫色的支线和边框指出，浅蓝色的支线/边框指出NADPsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被上标为CFSE, Treg按检视的比例反应物。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，培育3过后透过流式细胞核术监测。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg培育(complex)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者培育。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。用于特征性对照(激来生的响应细胞核不含treg)量化抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

三幅5 波动CD4+T细胞核对快速实质性的T细胞核再造的抑制作用更是敏感。SP第一组用深蓝色的支线和边框指出，HD第一组用紫色的支线和边框指出，浅蓝色的支线/边框指出NADPsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel上标，treg按检视的比例反应物。用抗CD3 /28微珠再造细胞核，培育3过后透过流式细胞核术(CD25反染)和细胞核因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同培育。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用百分率(b)。(c,d) CD25抑制作用百分率(c)和CD134抑制作用百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育之前的指出。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

论证：我们量化出来的论证是，来自快速实质性子的再造思绪CD4+Treg在GITR指出之前得到了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1DF肾病风险生殖之前的异质性的必要性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28